油菜籽中油的芥酸的测定气相色谱法-技术服务-三闪仪器-

油菜籽中油的芥酸的测定气相色谱法

GB 10219—88

1 主题内容与适用范围

　　本标准规定了检测菜籽油中芥酸的方法。

　　本标准适用于测定油菜籽中油和菜籽油的芥酸含量。

2 原理

　　将菜籽油中脂肪酸甘油酯转化为脂肪酸甲酯后，进行气相色谱测定，按校正峰面积归一化法计算其结果。

3 仪器设备及操作条件

3.1 气相色谱仪

3.1.1 备有氢火焰离子化检测器的气相色谱仪。

3.1.2 色谱柱：1～3m×2～4mm（内径）的玻璃柱或不锈钢柱。

3.1.2.1 色谱柱老化条件

　　将色谱柱与检测器相连的一端脱开，在185℃下，老化16h，其载气流速为20～60mL/min。再将柱箱温度升至195℃，继续老化2h。

3.1.2.2 色谱柱的性能指标

　　配制混有大致等量的硬脂酸甲酯和油酸甲酯的正已烷（或石油醚）溶液。调节样品浓度、进样量、柱温和载气流速，使硬脂酸甲酯的出峰时间在 15min以内，其峰高应约为记录纸满刻度的四分之三。

　　用公式（1）计算理论塔板数：

…………………………………………………（1）

式中：n──	色谱柱理论塔板数；
S──	起点到硬脂酸峰顶间的距离，mm；
W1──	硬脂酸的峰底宽，mm。

　　用公式（2）计算分辨率：

R=2Y/（W1+W2）………………………………………………（2）

式中：R──	色谱柱分辨率；
W1、W2──	硬脂酸和油酸的峰底宽，mm；
Y──	硬脂酸和油酸两峰顶间的距离（见图1），mm。

图 1　色谱柱柱效测定示意图

　　理论塔板数（n）最小应为2000，分辨率（R）最小应为1.25。且亚麻酸甲酯与花生一烯酸甲酯也应分开。当色谱柱使用一定期限后，分辨率（R）会逐渐变小。当小于其规定值时，就必须更换新的色谱柱。

3.1.3 载体：酸洗硅藻土色谱载体（如国产101白色酸洗载体及 Chromosorb W AW等），60～100目。

3.1.4 固定液：5％～20％的聚酯型固定液，如聚丁二酸二乙二醇酯（DEGS）或聚丁二酸丁二醇酯（BDS）等。也可使用其他适宜的固定液。

3.2 分析天平：感量0.1mg；

3.3 高速捣碎机；

3.4 小型粉碎机；

3.5 小型榨油机；

3.6 电热恒温水浴锅；

3.7 电热恒温干燥箱；

3.8 冷渗管（见图2）；

图 2　冷渗管示意图

3.9 酯化瓶：具塞，50～100mL，标准磨口，备有与其相配套的冷凝管；

3.10 微量注射器：10μL，最小刻度0.1μL；

3.11 研钵；

3.12 烧杯、锥形瓶、具塞试管、移液管、量筒等。

4 试剂和溶液

　　所有试剂都为分析纯；水为蒸馏水。

4.1 正已烷；

4.2 石油醚（HG 3—1003—76），沸程30～60℃或60～90℃；

4.3 无水乙醚（HG 3—1002—76）；

4.4 无水硫酸钠（HG 3—123—76）；

4.5 正庚烷；

4.6 氢氧化钾（GB 2306—80）；

4.7 无水甲醇（GB 863—79）；

4.8 钠；

4.9 氢氧化钾-甲醇溶液（0.4mol/L）：称取约2.3g氢氧化钾（4.6）溶于100mL无水甲醇（4.7）中，贮入具塞瓶中备用；

4.10 甲醇钠溶液：含1％钠的无水甲醇（4.7）溶液。从试剂罐的溶剂中取出约1g钠，用滤纸除去上面粘附着的溶剂，溶解于100mL无水甲醇中，等气泡放完并冷却后，贮入棕色瓶中备用，瓶塞上最好装有一硅胶干燥管；

4.11 石油醚-乙醚溶液：1∶1（V/V）；

4.12 盐酸-甲醇溶液：1mol/L；

4.13 石英砂、沸石。

5 测定步骤：

5.1 操作条件

5.1.1 柱箱温度：175～190℃；

5.1.2 汽化室温度：200℃左右；

5.1.3 检测器温度：190～250℃；

5.1.4 载气：干燥的氮气，其氧含量应小于10ppm，其流速为15～60mL/min。

5.1.5 氢气：纯度为99.9％，无有机杂质，其流速与载气相等。

5.1.6 空气：碳氢化合物以甲烷计应小于2ppm，其流速约为氢气的5～10倍。

5.2 油样制备

　　所制备的油样应是干燥、洁净的。可视具体条件选用下列方法：

5.2.1 称取油菜籽均匀样品约10g，精确至0.1g，在80℃下干燥2h，装入试管中，加入适量石油醚-乙醚溶液（4.11），用高速捣碎机捣碎，过滤（见图2B），蒸发并回收溶剂，贮入具塞瓶中备用。也可直接吸取滤液2mL，加入约1mL氢氧化钾-甲醇溶液（4.9）进行甲酯化反应（见5.3.1）。

5.2.2 称取油菜籽均匀样品约10g，精确至0.1g，80℃下干燥2h，倒入研钵中，加入适量石英砂和无水硫酸钠（4.4）研碎。也可先用粉碎机粉碎，再加入适量无水硫酸钠（4.4）拌匀。在冷渗管底部塞上适量脱脂棉，加入约1cm厚的无水硫酸钠（4. 4），再加入经研碎的油菜籽样品约5g，后倒入15～20mL石油醚（4.2），让其经冷渗管流入一小烧瓶，重复上述操作2次，蒸发并回收溶剂，将油贮入具塞瓶中备用（见图2A）。

5.2.3 用小型榨油机榨取油样，并通过冷渗管过滤（见图2B），以除去水分和杂质。

5.2.4 如样品是菜籽油，应通过冷渗管过滤（见图2B）。

5.3 脂肪酸甲酯的制备及测定

　　可视具体条件选择下列方法：

5.3.1 称取100～250mg菜籽油样，精确至1mg，装入10mL具塞试管中，加入石油醚-乙醚溶液（4.11）约2mL，稍事振摇，待油样溶解后，再加入氢氧化钾-甲醇溶液（4.9）约1mL，混匀，在室温下放置约30min，再沿瓶壁加入水，静置，待分层后，吸取上清液 0.5～2μL进行气相色谱测定。

5.3.2 称取100～250mg菜籽油样，精确至1mg，放入酯化瓶中，加入5mL甲醇钠溶液（4.10）及沸石数粒，接上冷凝管，加热回流约15min，直至油珠消失，再由冷凝管加入约6mL盐酸-甲醇溶液（4.12），继续加热回流约10min，停止加热，冷却后，取下冷凝管，将酯化瓶中的溶液倒入分液漏斗，加入10mL水和10mL正庚烷，猛烈振摇2min，分层后，弃去水相，将上层正庚烷溶液过滤（见图2B），吸取0.5～2μL正庚烷溶液进行气相色谱测定。

6 测定结果的计算

6.1 测定结果按校正峰面积归一化法计算。

6.1.1 校正因子的测定：按菜籽油样品各脂肪酸的组成比称取脂肪酸甲酯溶于正已烷中，配制成混合脂肪酸甲酯标准样品。将配制好的混合脂肪酸甲酯标准样品，按测定一般样品的操作条件进行气相色谱测定。

标准样品第i组分的质量百分比Mi，按式（3）计算：

Mi=（mi/∑mi）×100……………………………………………（3）

式中：Mi──	混合脂肪酸甲酯标准样品中第i组分的质量百分比；
mi──	混合脂肪酸甲酯标准样品中第i组分的质量，mg；
Σmi──	混合脂肪酸甲酯标准样品中所有组分的质量之和，mg。

　　由色谱图求得的第i组分的面积百分比Ci，按式（4）计算：

Ci=（Ai/∑Ai）×100……………………………………………（4）

式中：Ci──	第i组分的面积百分比；
Ai──	第i组分的色谱峰面积；
ΣAi──	所有组分的色谱峰面积之和。

　　第i组分的校正因子Ki，按式（5）计算：

Ki=mi×∑Ai/（Ai×∑mi）………………………………………（5）

式中：Ki──	第i组分脂肪酸甲酯的校正因子；
mi──	混合脂肪酸甲酯标准样品中第i组分的质量，mg；
Σmi──	混合脂肪酸甲酯标准样品中所有组分的质量之和，mg；
Ai──	第i组分的色谱峰面积；
ΣAi──	所有组分的色谱峰面积之和。

　　第i组分相对响应值校正因子，按式（6）计算：

=Ki/Kc16………………………………………………………（6）

式中： ──	第i组分脂肪酸甲酯的相对响应值校正因子；
Ki──	第i组分脂肪酸甲酯的校正因子；
KC16──	棕榈酸甲酯的校正因子。

　　则棕榈酸甲酯的相对响应值校正因子K′C16=KC16/KC16=1。

6.1.2 菜籽油样品中芥酸的质量百分比按式（7）计算：

MC22∶1=〔K’C22∶1×AC22∶1/（∑（ ×Ai）〕×100……………………………（7）

式中：MC22∶1──	芥酸的质量百分比；
K′C22∶1──	芥酸的相对响应值校正因子；
AC22∶1──	芥酸的色谱峰面积；
Σ（ ×Ai）──	所有组分脂肪酸甲酯的相对响应值校正因子同其相对应的色谱峰面积的乘积之和。

6.1.3 如在对其芥酸含量要求不十分严格的情况下，也可不引入校正因子，按式（8）计算：

CC22：1=（AC22：1/∑Ai）×100……………………………………………（8）

式中：CC22∶1──	芥酸含量百分比；
AC22∶1──	芥酸色谱峰面积；
∑Ai──	所有组分色谱峰面积之和。

6.2 平行测定结果用算术平均值表示，保留小数后两位。

6.3 重复性

　　在同一天，同一个操作者，用同一台仪器对同一个油样进行两次平行测定，当芥酸含量高于5％时，其相对相差不得超过3％，而两值之差不得超过1％（绝对值）。当芥酸含量低于5％时，其两值之差不得超过0.2％（绝对值）。

6.4 重现性

　　在不同的实验室对同一个油样进行两次平行测定，当芥酸含量高于5％时，其相对相差不得超过10％，而两值之差不得超过3％（绝对值）。当芥酸含量低于5％时，两值之差不得超过0.5％（绝对值）。